人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 兰风华 朱忠勇 涂向东 谢飞
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶 表达载体 分子克隆
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 273-275
• 页数: 3页
• 分类号: R446.1
• 字数: 2317字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2004.04.012

摘要

目的构建基因工程菌株,以获得重组人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶(ALT2)蛋白.方法逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段,插入原核表达载体pET-28a,构建成融合表达质粒pET28-ALT2,将其转化大肠杆菌BL21 DE3,IPTG诱导表达.SDS-PAGE、活力测定、活性染色及western blot鉴定表达产物.结果重组质粒pET28-ALT2测序和酶切结果与预期完全符合.IPTG诱导后,阳性菌体裂解物上清ALT2活性很高,PAGE出现一分子量58 000蛋白条带,可被抗ALT1抗血清识别,酶活性染色显示有ALT活性.结论已成功将ALT2基因克隆到pET-28a载体,ALT2蛋白得到可溶性高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	涂向东	南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科	46	140	6.0	10.0
2	朱忠勇	南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科	98	953	11.0	29.0
3	兰风华	南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科	88	314	9.0	12.0
4	谢飞	南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科	25	134	8.0	11.0