大鼠β神经生长因子前体基因的克隆及其真核表达载体pEGFP-NGF的构建

• 作者: 丁鹏 冯忠堂 杨志敏 王廷华 董坚 路华 路钢
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 神经生长因子 T-A克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 761-763
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 1824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2004.06.004

摘要

目的克隆大鼠脑组织中神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长序列,构建其真核表达载体pEGFP-NGF.方法采用RT-PCR方法扩增NGFβ亚基前体的全长序列,克隆入载体pMD 18-T,转化大肠杆菌JM109,挑选白色菌落行酶切鉴定、PCR鉴定及序列分析;利用高保真Taq酶自重组质粒pMD 18-T/NGF中扩增目的基因NGF,将目的基因与真核表达载体pEGFP-N1行双酶切,T4连接酶连接,转化大肠杆菌DH-5α,挑选白色菌落行酶切鉴定.结果pMD 18-T/NGF测序结果与GenBank的序列完全一致,pEGFP-NGF行限制性内切酶HindⅢ、BamHⅠ酶切,可见酶切片断与插入基因长度相符.结论成功从大鼠脑组织中克隆神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长序列,并构建其真核表达载体pEGFP-NGF,为从分子水平开展NGF转基因相关研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王廷华	昆明医学院神经科学研究所	307	1291	16.0	23.0
2	董坚	昆明医学院第一附属医院中心实验室	56	254	8.0	12.0
3	冯忠堂	昆明医学院神经科学研究所	141	600	12.0	17.0
4	杨志敏	昆明医学院第一附属医院神经外科	42	186	8.0	12.0
5	丁鹏	昆明医学院神经科学研究所	25	105	7.0	8.0
6	路华	昆明医学院神经科学研究所	15	108	7.0	10.0
7	路钢	昆明医学院神经科学研究所	5	19	3.0	4.0