绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅴ基因的克隆与表达

• 作者: 刘北东 刘恒 周麒 宋金柱 杨谦 陈佃福
• 来源期刊: 高技术通讯
• 关键词: 绿色木霉 葡聚糖内切酶Ⅴ 酿酒酵母 超声波处理 表达
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 生物与现代农业技术
• 页码范围: 28-32
• 页数: 5页
• 字数: 3769字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2004.08.007

摘要

采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅴ(EGⅤ)的cDNA 基因.测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2 上,转化酿酒酵母,同时研究了超声波处理对酵母完整细胞转化的影响.转化子用2%的β-D-半乳糖进行诱导,用Northern 杂交和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明, EGⅤ的cDNA 基因开放阅读框长度为741bp,编码247个氨基酸,推测的蛋白质分子量为24.99kDa.超声波处理60s的酿酒酵母的转化率最高,在相同条件下是未处理组的2倍.酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60小时达到最高0.046U/ml.最适酶解温度为60℃,最适pH值为5.4.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨谦	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	191	3458	29.0	49.0
2	宋金柱	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	28	602	14.0	24.0
3	刘恒	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	11	139	5.0	11.0
4	刘北东	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	5	213	5.0	5.0
5	周麒	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	3	118	3.0	3.0
6	陈佃福	哈尔滨工业大学生命科学与工程系	3	118	3.0	3.0