绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因在大肠肝菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究

• 作者: 左文朴 庞宗文 杜丽琴 秦国梅 韦宇拓 黄日波 黄艳燕
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: 绿色木霉 葡聚糖内切酶III 大肠杆菌 定点饱和突变
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-24
• 页数: 7页
• 字数: 3937字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2009.05.004

摘要

将绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3).利用金属亲和层析对重组EGIII进行纯化,纯化后酶比活力达到6 U/mg蛋白,最适反应温度为60 ℃,最适pH为4.0.同时对EGIII催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变,各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F,其比活力为野生型EGIII的2.8倍和3.45倍.突变酶E218F的Km提高了一倍,催化效率Kcat提高了5.4倍;而R130P的Km和Kcat没有明显变化.两个突变酶的最适酶解温度和pH分别都提高至65 ℃和4.4.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜丽琴	广西大学生命科学与技术学院	33	117	7.0	9.0
2	韦宇拓	广西大学生命科学与技术学院	83	584	14.0	20.0
3	黄日波	广西大学生命科学与技术学院	84	623	14.0	19.0
7	庞宗文	广西大学生命科学与技术学院	56	403	11.0	17.0
8	秦国梅	广西大学生命科学与技术学院	3	8	2.0	2.0
9	左文朴	广西大学生命科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
10	黄艳燕	广西大学生命科学与技术学院	3	11	2.0	3.0