绿色木霉EG Ⅲ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达

• 作者: 全艳彩 刘泽寰 台艳 唐根云 王峻梅 肖文娟 龚映雪
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 内切葡聚糖酶Ⅲ 酿酒酵母 绿色木霉 整合表达
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 页码范围: 83-88
• 页数: 6页
• 分类号: Q939.97
• 字数: 3933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-6579.2009.06.017

摘要

通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1 257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%.将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析.结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60 ℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达.