HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建

• 作者: 李君武 李小兰 林绍强 江静 王志鹏 许小亮 韦静 黄泽棋
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,丙型 基因 载体
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 2155-2157,2160
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2004.11.046

摘要

目的:构建HCV NS3基因真核表达载体,为进一步研究和解析HCV NS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件.方法: 将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1-3011质粒转化感受态菌JM109并扩增;提取pBRTM/HCV1-3011质粒;从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCV NS3片段;并将其插入到克隆载体pMD 18-T中,再与表达载体pcDNA3.1(-)重组,以得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3;最后限制性酶切鉴定HCV NS3表达载体.结果:从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCV NS3片段大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3.1/NS3内.结论: 成功地构建了HCV NS3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3.