获得重构基因的简捷方法--重叠延伸PCR

• 作者: 刘力华 刘玲丽 姜艳芳 张琨 方艳秋 时阳 段秀梅 王晓祺 许淑芬 谭岩
• 来源期刊: 吉林大学学报(医学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 嵌合白细胞介素18 重叠延伸PCR 非对称PCR
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 713-716
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2004.05.016

摘要

目的:构建IFN-β信号肽序列与白细胞介素18(IL-18)成熟肽的重组嵌合分子.方法:从BALB/c鼠基因组DNA扩增IFN-β信号肽序列;由小鼠Pro-IL-18真核表达质粒获得IL-18成熟肽序列;以非对称PCR技术得到IFN-β信号肽编码区的反义链和IL-18成熟肽正链;采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)产生具有IFN-β信号肽与IL-18成熟肽的嵌合编码序列;定向连方式构建嵌合IL-18的表达质粒并测序.结果:连续胶PAGE表明非对称PCR可分别扩增出两个靶序列的特异性单链,大小符合预期.IFN-β信号肽对称PCR产物与IL-18非对称PCR产物混合作为模板,进行重叠延伸;电泳分析可见清晰的嵌合片段;测序显示重组质粒的表达框由两个设计的靶序列构成,且无移码.结论:重叠延伸PCR是一种获得重构基因的简捷方法.