运用重叠延伸PCR技术构建在甘丙肽全长cDNA嵌入第二内含子的重构分子

• 作者: 刘田福 司苏晋 薛亮亮 雷小春
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重叠延伸PCR 甘丙肽 内含子 重构分子
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 156-160
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 3542字
• 语种: 中文

摘要

构建嵌入第二内含子的甘丙肽(Galanin,GAL)全长基因组cDNA的重构分子.通过RT-PCR扩增出cDNA编区的序列,分别从基因组中扩增出cDNA的5'和3'端部分非编码序列;使用重叠延伸PCR(overlap extention PCR,OE-PCR)方法将三个片段重叠获得全长cDNA序列;再将全长cDNA从第三外显子第15个碱基处分成两部分,分开的cDNA前半部分和后半部分以及第二内含子进行重叠延伸获得重构分子,含有第二内含子的甘丙肽(GAL)全长基因组cDNA;将重构分子连入pMDI9-T simple载体.电泳分析观察到清晰的重构分子片段;测序显示重构分子由所设计的序列组成,第二内含子插入的位置准确,且无移码.使用重叠延伸PCR能够成功在cDNA中插入内含子获得一段重构基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘田福	山西医科大学实验动物中心	76	395	9.0	16.0
2	薛亮亮	山西医科大学实验动物中心	6	43	2.0	6.0
3	司苏晋	山西医科大学实验动物中心	8	21	3.0	4.0
4	雷小春	山西医科大学实验动物中心	5	12	2.0	3.0