甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ)的克隆及其过表达转基因载体的构建

• 作者: 刘田福 司苏晋 张引红 薛亮亮 雷小春
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甘丙肽 重叠延伸PCR 血小板源性生长因子启动子 转基因载体
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 48-53
• 分类号: R363|R332
• 字数: 4047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2011.01.011

摘要

目的 克隆甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ),构建小鼠神经系统特异性表达甘丙肽(galanin,GAL)的转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为制备GAL转基因小鼠做准备.方法 通过常规PCR、RT-PCR及重叠延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)扩增出插入GAL第二内含子的GAL全长cDNA的重构基因GAL(intronⅡ),将GAL(intronⅡ)克隆入T载体进行酶切、测序鉴定;同时从psisCAT6α中切下血小板源性生长因子β链(platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β)启动子片段连接到空载体pUC18上构建出重组载体pUC18/PDGF-β-promoter;然后将GAL(intronⅡ)定向克隆于pUC18/PDGF-β-promoter下游,构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).结果 PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).通过对重构基因GAL(intronⅡ)的GALcDNA和第二内含子序列测序证实其与GenBank中的标准序列一致,GAL(intronⅡ)中第二内含子插入的位置准确,且无移码.结论 使用重叠延伸PCR扩增重构基因GAL(intronⅡ)并成功构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为转基因小鼠制备奠定一定的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘田福	山西医科大学实验动物中心	76	395	9.0	16.0
2	张引红	山西医科大学实验动物中心	17	66	4.0	7.0
3	薛亮亮	山西医科大学实验动物中心	6	43	2.0	6.0
4	司苏晋	山西医科大学实验动物中心	8	21	3.0	4.0
5	雷小春	山西医科大学实验动物中心	5	12	2.0	3.0