云南个旧肺鳞癌YTMLC细胞cDNA文库构建和鉴定

• 作者: 李海红 王秦秦 马丽菊
• 来源期刊: 医学研究通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 cDNA 文库 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-16
• 页数: 3页
• 分类号: R73
• 字数: 4100字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-548X.2004.01.004

摘要

目的构建云南个旧人肺鳞癌YTMLC-90细胞cDNA文库.方法从培养的人肺鳞癌YTMLC-90细胞株中提取总RNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含SfiⅠB酶切位点)合成cDNA第一链,同时根据真核生物mRNA5'端帽子结构特点,利用SMART寡核苷酸(含SfiⅠ A酶切位点)作为cDNA第一链在mRNA 5'端延伸出去的模板,进而以此序列为引物,利用LD-PCR(long-distance PCR)合成双链cDNA,双链cDNA经Sfi Ⅰ(Ⅰ A和Ⅰ B)酶切和过柱分级分离后,克隆入经Sfi Ⅰ酶切的载体后经体外包装而成cDNA文库.结果人肺癌细胞YTMLC-90的cDNA文库获得1.01×106 pfu/ml个重组子,重组率为93.2%,文库扩增后,滴度达5.24×109pfu/ml,插入cDNA的长度为7.50～3000bp.结论所构建的cDNA文库具有较好的质量,该文库为进一步筛选、克隆肺癌特异表达基因莫定了基础.