人巨噬细胞金属弹性蛋白酶基因真核表达载体的构建及其鉴定

• 作者: 李海民 李韧 窦科峰 郭军
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 巨噬细胞 RT-PCR 基质金属蛋白酶-12
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 205-207
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1001-9030.2004.02.030

摘要

目的构建一个包含人巨噬细胞金属弹性蛋白酶(HME)基因全部功能区的重组真核表达载体pcDNA3.1(-)/HME,为进一步研究人巨噬细胞金属弹性蛋白酶对体内肿瘤血管生成的影响奠定基础.方法用Trizol试剂法从经体外纯化培养的人巨噬细胞中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌DH5α扩增以获得重组载体.结果 RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经双酶切鉴定及测序证实已将人巨噬细胞金属弹性蛋白酶基因cDNA片段正确插入真核表达载体中.结论成功获得pcDNA3.1(-)/HME重组真核表达载体.