LC-1 ScFv偶联GFP基因的构建及表达

• 作者: 于红 徐飞虎 谭皓思 龚兴国
• 来源期刊: 浙江大学学报（工学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 单链抗体 原核表达系统
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 751-755
• 页数: 5页
• 分类号: Q7
• 字数: 4458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-973X.2005.05.031

摘要

从具有高效蛋白表达及活力的抗肺癌杂交瘤单克隆细胞株(LC-1)抽提总RNA,反转录成cDNA.根据肿瘤单链抗体(ScFv)基因设计引物,用多聚酶链式反应(PCR)克隆出抗体的重链和轻链基因,并通过重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接为单链抗体基因.改造后的ScFv与绿色荧光蛋白(GFP)基因连接,构建表达质粒ProGFP-ScFv,随后转化大肠杆菌JMl09,用诱导剂IPTG进行诱导表达.表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化,进行SDS-PAGE电泳分析其纯度.酶联免疫检测(ELISA)表明该蛋白已具有抗体活性.395 nm激光激发显示绿色荧光,表明目的基因在原核生物中存在表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚兴国		2	18	2.0	2.0
2	于红		1	2	1.0	1.0
3	徐飞虎		1	2	1.0	1.0
4	谭皓思		1	2	1.0	1.0