重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达

• 作者: 周克元 唐旭东 熊亮 黄秀兰
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: LMP1 scFv/tP 基因拼装 表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-4,13
• 页数: 5页
• 分类号: R318.34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2008.01.001

摘要

目的 体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白.方法 设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5'和3'端设计EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的 基因片段亚克隆至pMD 18-Tsimple载体中,经过酶切鉴定和测序验证.进一步将目的 基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证.结果 各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的 蛋白.结论 成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周克元	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	210	1945	22.0	36.0
2	黄秀兰	广东医学院附属医院儿科研究室	53	425	8.0	19.0
6	熊亮	广东医学院赣南医学院预防医学系	5	19	3.0	4.0
7	唐旭东	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	49	273	9.0	14.0