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摘要:
目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础.方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM-T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a-轻链,转化E.coli BL21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western 印迹鉴定重组BoNT/A 轻链.结果:经PCR获得的BoNT/A 轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达99.9%以上.表达工程菌BL21/pET21a-A LC于37℃经0.7 mmol/L IPTG诱导6 h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的23%.经过镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A 轻链的纯度可达97%以上.Western 印迹结果表明,重组BoNT/A 轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应.结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A 轻链片段,其抗原性良好.
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文献信息
篇名 重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)蛋白的表达、纯化与鉴定
来源期刊 军事医学科学院院刊 学科 医学
关键词 肉毒神经毒素A(BoNT/A) 轻链 克隆表达 Ni-NTA亲和层析
年,卷(期) 2005,(1) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 30-33
页数 4页 分类号 R996.1
字数 4625字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1674-9960.2005.01.008
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王景林 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 44 147 6.0 9.0
2 贾宏丽 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 5 10 2.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
肉毒神经毒素A(BoNT/A)
轻链
克隆表达
Ni-NTA亲和层析
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
军事医学
月刊
1674-9960
11-5950/R
大16开
北京太平路27号
82-757
1956
chi
出版文献量(篇)
4313
总下载数(次)
13
总被引数(次)
15987
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
论文1v1指导