A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测

• 作者: 安佳佳 张惟材 徐威 汪建华 熊向华 胡颖 赵鹏 韦娜
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: A型肉毒神经毒素 噬菌体抗体库 抗体,单克隆
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 396-400
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 5437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.05.009

摘要

目的 从全合成人源性噬菌体单链抗体库中筛选抗A型肉毒神经毒素轻链(BoNT/A LC)特异性单抗,并进行全抗的表达、纯化与鉴定.方法 根据大肠杆菌密码子偏好性优化并合成BoNT/A LC序列,克隆至pTIG质粒,转化BL21(DE3) plysS感受态细胞,IPTG诱导表达后Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白.利用纯化的轻链蛋白从噬菌体抗体库中经“吸附-洗脱-扩增”程序淘选富集抗体并进行特异性筛选.PCR扩增抗体轻重链可变区分别连入L293-CL和H293载体,瞬时共转染293-F细胞,培养上清经Protein A柱纯化,通过SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测抗体纯度和特异性.结果 可溶性表达的BoNT/A LC占全菌蛋白的36.8％,纯化后蛋白纯度达99％.从噬菌体抗体库中筛选到10株单抗,选择其中特异性最好的两株单抗Lab1、Lab2制备了全抗,Western印迹和ELISA检测结果显示其可特异性识别结合BoNT/A LC蛋白.结论 该研究得到了两株特异性的BoNT/A LC抗体,可能用于A型肉毒毒素检测和肉毒中毒治疗.