含PHYA基因的EDSV转移载体构建及表达研究

• 作者: 杜华茂 王洪波 范守成 谢和芳 黄伟
• 来源期刊: 西南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 植酸酶 减蛋综合征病毒 转移载体 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 页码范围: 132-135
• 页数: 4页
• 分类号: S858.31
• 字数: 2723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-9868.2005.01.032

摘要

将原核表达载体pET 30中的黑曲霉源植酸酶基因(phyA)亚克隆到真核表达载体pCDNA 3的kpnI-EcoRI位点.根据pCDNA 3的序列在增强子的上游(209位)和BGH polyA下游(2049位)设计1对引物HM 1,HM 2扩增出含phyA基因的表达盒.将此表达盒以平末端连接的方式克隆到减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端的转移载体pUHBC的SalI位点,酶切分析鉴定表达盒的方向,得到反向插入重组质粒pEDS-phyA.用Lipofectamine 2000将8μg pEDS-phyA转染90%满度的鸭胚成纤维细胞,6 h后换生长液,24 h后收获细胞,以pUHBC转染作对照.钼酸胺法测定试验样品植酸酶酶活为977 U/mL.实验结果表达我们已成功地构建了含植酸酶基因的转移载体,为进一步构建重组减蛋综合征病毒载体表达植酸酶打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄伟	西南农业大学蚕学与生物技术学院	5	37	2.0	5.0
2	王洪波		2	1	1.0	1.0
3	谢和芳	西南农业大学蚕学与生物技术学院	3	19	1.0	3.0
4	杜华茂	西南农业大学蚕学与生物技术学院	2	1	1.0	1.0
5	范守成		1	1	1.0	1.0