微小牛蜱Bm86基因的真核表达

• 作者: 任巧云 党志胜 关贵全 刘志杰 刘爱红 李文卉 殷宏 罗建勋 马米玲 高金亮
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 微小牛蜱 Bm86基因 毕赤酵母 真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 寄生虫学
• 页码范围: 718-722
• 页数: 5页
• 分类号: S852.746|Q786
• 字数: 4169字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.09.011

摘要

采用RT-PCR技术从微小牛蜱饥饿幼蜱破解物中扩增到Bm86基因,将其与巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K重组构建了重组表达载体pPIC9K-Bm86,测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化后采用电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母菌GS115,经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的68 ku重组Bm86蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的32%以上,诱导96 h目的蛋白的表达量为0.36 mg/mL.