微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 任巧云 关贵全 刘军龙 刘爱红 李有全 殷宏 王屿 罗建勋 马米玲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 微小牛蜱 Bm91基因 分泌表达
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 569-575
• 页数: 7页
• 分类号: S852.746|Q786
• 字数: 5859字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.07.005

摘要

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白.