微小牛蜱Bm91基因的原核表达

• 作者: 任巧云 关贵全 刘军龙 刘志杰 刘爱红 李有全 殷宏 牛庆丽 王玙 罗建勋 郝雪峰 马米玲
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 微小牛蜱 Bm91基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 6-9
• 分类号: Q786
• 字数: 2753字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2010.12.002

摘要

根据GenBank收录的微小牛蜱Bm91基因序列设计一对表达引物,以微小牛蜱幼蜱总RNA反转录合成的cDNA为模板,扩增获得了Bm91基因,其长度为1908 bp,包含一个大小为1 833 bp的完整开放阅读框,编码611个氨基酸,该蛋白预期分子质量为83 ku.将Bm91基因片段亚克隆到原核表达载体pET-30a,构建重组原核表达载体pET-30a-Bm91,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,发现在0.8 mmol/LIPTG,诱导时间2 h,温度37℃条件下,目的重组蛋白表达量最大,约占蛋白总量的20%.SDS-PAGE检测表明,表达产物为分子质量为83 ku的融合蛋白,与预期大小一致;Western blot分析表明,表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别.