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应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒 E2蛋白反式调节基因
应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒 E2蛋白反式调节基因
作者:
刘妍
张树林
成军
杨倩
杨瑗
白桂芹
蔺淑梅
黄艳萍
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
丙型肝炎病毒
E2蛋白
抑制性消减杂交
新基因
摘要:
目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCV E2蛋白反式调节相关基因.方法以HCV E2表达质粒pcDNA3.1(-)-E2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果成功构建人HCV E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到78个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到100~1 000 bp插入片段.挑取38个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得35个已知基因序列和3个未知基因.通过生物信息学分析获得其全长序列,其功能正在研究中.结论应用SSH技术成功构建了HCV E2反式调节基因差异表达的cDNA消减文库.该文库的建立为进一步阐明HCV E2反式调节的靶基因及致慢性肝脏疾病发生的分子生物学机制提供理论依据.
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文献信息
篇名
应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒 E2蛋白反式调节基因
来源期刊
胃肠病学和肝病学杂志
学科
医学
关键词
丙型肝炎病毒
E2蛋白
抑制性消减杂交
新基因
年,卷(期)
2005,(4)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
327-330
页数
4页
分类号
R373.2
字数
3784字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1006-5709.2005.04.001
五维指标
传播情况
被引次数趋势
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引文网络
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节点文献
丙型肝炎病毒
E2蛋白
抑制性消减杂交
新基因
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
胃肠病学和肝病学杂志
主办单位:
郑州大学
出版周期:
月刊
ISSN:
1006-5709
CN:
41-1221/R
开本:
16开
出版地:
郑州市大学路40号
邮发代号:
36-159
创刊时间:
1992
语种:
chi
出版文献量(篇)
6661
总下载数(次)
9
总被引数(次)
38521
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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