中国对虾6种组织cDNA文库的构建

• 作者: 张晓军 张绍萍 李云 李富花 王兵 相建海 钟文慧
• 来源期刊: 海洋学报（中文版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 中国对虾 cDNA文库 功能基因
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 92-95
• 页数: 4页
• 分类号: Q343.1
• 字数: 2776字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-4193.2005.05.013

摘要

以中国对虾血液、眼柄、卵巢、雌虾头胸部、雄虾头胸部和三倍体对虾头胸部组织为材料,采用异硫氰酸胍-酸酚法提取总RNA;用磁珠法纯化mRNA;用Uni ZAP cDNA合成试剂盒合成双链cDNA并进行修饰,将cDNA定向连接在Uni ZAP载体上;经Gigapack GoldPackage包装试剂盒包装成为噬菌体颗粒,转染宿主XL1 Blue MRF'菌株细胞,形成初级文库.初级文库经转染进一步扩增,形成稳定的cDNA文库.6个文库的库容在0.2×106～1.3×106之间,重组率都超过90%.从各文库随机取出6～10个清晰的噬菌斑进行PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳检测,其插入片段长度为500～2 500 bp.由初步功能基因克隆获得阳性结果.多项指标表明,所构建的对虾cDNA文库质量较高,为进一步筛选目的基因、EST测序和制作基因芯片提供了有效的工具.