中国明对虾"黄海1号"血细胞和肌肉cDNA文库的构建

• 作者: 何玉英 刘萍 李健 李吉涛 王清印 陈萍
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 中国明对虾 血细胞 肌肉 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 781-785
• 页数: 5页
• 分类号: S917
• 字数: 3299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2009.05.018

摘要

采用SMART(Switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术构建了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血细胞和肌肉组织全长cDNA文库.以中国明对虾"黄海1号"血细胞和肌肉组织为材料,Trizol法提取总RNA,磁珠法纯化mRNA后,用SMART cDNA合成试剂盒合成双链cDNA.双链cDNA经SfiI酶切和CHROMA SPINtM-400过柱分级分离后,与λTriplEx2载体两臂进行连接,随后进行λ噬菌体体外包装反应,构建血细胞和肌肉全长cDNA文库.肌肉组织原始文库滴度为0.77×106 pfu/mL,血细胞原始文库滴度为2.36×106 pfu/mL;扩增后,肌肉组织文库滴度为3.0×109 pfu/mL,血细胞文库滴度为5.6×109 pfu/mL,重组率均达到98%以上.从各文库随机取出10个清晰的噬菌斑进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测,其插入片段长度为400～2000bp,证明2个文库均具有较高的质量.785]