SARS冠状病毒N蛋白的表达及其诱导的免疫应答

• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SARS 冠状病毒 N蛋白 纯化 免疫应答
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 855-859
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4102字
• 语种: 中文

摘要

目的表达和纯化SARS冠状病毒的N蛋白,分析其诱导的免疫应答.方法从重组克隆pMD18-N中切取N基因的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达N蛋白,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答.结果 N基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌表达了SARS冠状病毒的N蛋白;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被重组N蛋白的GST融合蛋白的免疫血清识别,并诱导小鼠产生了高滴度的抗体和Th1/Th2型的免疫应答.结论成功构建了N蛋白的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性.