含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建

• 作者: 刘艳丽 徐志文 殷华平 王小玉 王新 罗燕 苟琳 郭万柱
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病毒 猪细小病毒 VP2基因 EGFP 重组病毒
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1064-1068
• 页数: 5页
• 分类号: S858.288.3|Q784
• 字数: 2968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2005.10.015

摘要

将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2.采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRVDNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHI酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPVVP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPVVP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病一伪狂犬病重组病毒.