含变链菌SBR基因的双启动子质粒pCN-SSIE的构建及其免疫原性检测

• 作者: 刘浩 刘贤锡 卞继峰 姜广水 孙继军 王晓华
• 来源期刊: 上海口腔医学
• 学科: 医学
• 关键词: DNA疫苗 减毒沙门氏菌 龋病 变形链球菌
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 479-484
• 页数: 6页
• 分类号: R781.1
• 字数: 3977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7248.2005.05.011

摘要

目的:构建含有编码变形链球菌致龋毒力因子SBR基因的双启动子防龋DNA疫苗pCN-SSIE,以减毒沙门菌为载体进行高效黏膜免疫.方法:通过PCR扩增编码变形链球菌表面蛋白抗原的唾液结合区段(SBR)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,将SBR基因插入到双启动子表达载体pCMVnir中,在SBR基因上游和下游依次插入人工合成的tPA信号肽基因序列、核糖体内部进入位点(IRES)基因和EGFP基因,构建质粒pCN-SSIE.通过DNA测序和酶切分析证明,双启动子表达质粒pCN-SSIE构建成功后,再用该质粒转化减毒沙门菌SL3261和转染CHO细胞,检测SBR在原核细胞和真核细胞中的表达状况,最后用pCN-SSIE裸质粒通过肌内注射免疫小鼠,检测其血清中的抗SBR特异抗体.结果:DNA测序和酶切分析均证明,构建的双启动子表达质粒pCN-SSIE开放读码框架正确;质粒在原核和真核细胞中均能正常表达;在免疫小鼠的血清中检测到了高水平的抗SBR特异IgG.结论:构建成功双启动子表达质粒pCN-SSIE,在体外真核和原核细胞中均能正常表达,用其作为DNA疫苗免疫动物,可诱导明显的免疫应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜广水	山东大学口腔医学院	59	269	8.0	12.0
2	刘贤锡	山东大学医学院医学分子生物学实验中心	65	213	7.0	11.0
3	卞继峰	山东大学医学院医学分子生物学实验中心	37	165	6.0	10.0
4	孙继军	山东大学口腔医学院	5	20	3.0	4.0
5	刘浩	山东大学口腔医学院	15	62	4.0	7.0
6	王晓华	山东大学口腔医学院	10	30	3.0	4.0