NF-κB相互作用多肽原核表达载体的构建、表达与纯化

• 作者: 史海水 徐祥 李生茂 梁华平
• 来源期刊: 河北大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: NF-κB 多肽 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 530-534
• 页数: 5页
• 分类号: Q503|Q51
• 字数: 2934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1565.2005.05.019

摘要

为了获得高纯度的可溶性NF-κB相互作用多肽,首先以酵母双杂交技术筛选获得的NF-κB相互作用多肽的酵母表达质粒pGAD GH/pp10为模板,扩增多肽基因片段,后经BglⅡ,StuⅠ双酶切后连接到pET-42a(+)载体中,构建GST/多肽融合蛋白的原核表达载体,并将GST/多肽融合蛋白的原核表达载体转化入BL-21菌株,用0.4 mmol/L IPTG于30 ℃诱导表达4 h,后经GST亲和纯化GST/多肽融合蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定融合蛋白的表达和纯度.实验结果表明,成功地构建了NF-κB相互作用多肽的GST/多肽融合蛋白原核表达载体,进行了GST/多肽融合蛋白的诱导表达,融合蛋白的表达为可溶性表达,最终纯化获得纯度约为80%的可溶性GST/多肽融合蛋白,这将为后继利用GST pull-down,Bio-sensor,EMSA等实验进一步验证NF-κB相互作用多肽的功能提供可靠的材料来源奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐祥	第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室	50	402	11.0	17.0
2	梁华平	第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室	67	683	15.0	23.0
3	史海水	河北医科大学生物化学教研室	16	85	4.0	9.0
5	李生茂	第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室	6	49	3.0	6.0