人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 吴军 吴思宇 张全顺 张忠荣 汤守营 王晓军 王爱民 贺伟峰 郭庆山
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨保护素 腺病毒 同源重组 基因治疗
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 167-170
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4025字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2005.02.008

摘要

目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力.方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)进行感染.采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度.结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功,病毒滴度可达2.5×109pfu/ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含hOPG重组腺病毒载体.