人CD59基因的突变和表达及其活性研究

• 作者: 张艳丽 高美华
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人突变CD59 真核表达 中国仓鼠卵巢细胞 抗补体活性
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 151-154
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3024字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2005.02.007

摘要

目的: 构建人突变CD59(hmCD59)基因的真核表达系统, 深入研究hmCD59在糖尿病血管并发症中的作用.方法: 分别构建两种含有hmCD59 全长cDNA序列的重组pALTER质粒, 运用脂质体介导法, 与pcDNA3质粒共转染CHO细胞, 以G418筛选阳性克隆(编号为hmCD59-1-CHO及hmCD59-2-CHO).应用荧光抗体技术、免疫酶联技术及Western blot, 进一步检测hmCD59蛋白在转染细胞膜表面的表达.通过双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯(BCECF/AM)荧光染料释放试验, 对hmCD59蛋白糖基化前后的抗补体活性进行检测.结果: 筛选出的阳性克隆细胞用荧光抗体技术、免疫酶联技术检测表明, 在细胞膜表面有hmCD59分子表达.将细胞的裂解物进行Western blot证实, 在其相对分子质量(Mr)为20 000处可见1条与CD59的Mr相当的蛋白带.BCECF/AM荧光染料释放试验提示, 两种突变质粒的表达产物均具有抗补体活性, 糖基化后活性减弱.结论: 获得两株可稳定表达hmCD59的细胞.表达的hmCD59具有抗补体活性, 但糖基化后活性减弱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张艳丽	青岛大学医学院免疫学教研室	40	161	6.0	11.0
2	高美华	青岛大学医学院免疫学教研室	181	728	12.0	19.0