重组人HMGN2多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 冯云 吴琦 李绚 熊文碧 王伯瑶 王国兴 黄宁
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率非组蛋白N2 原核表达 多克隆抗体 单核吞噬细胞 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 451-455
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4877字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.04.001

摘要

目的制备人高迁移率非组蛋白N2(HMGN2)多克隆抗体,并用于HMGN2的亚细胞定位分析.方法提取人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)总RNA,应用RT-PCR从其总RNA中分离HMGN2 cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMGN2基因大肠杆菌表达载体.应用GST亲合层析柱分离GST-HMGN2融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化.用ELISA法检测HMGN2抗体,免疫细胞化学染色法分析HMGN2的亚细胞分布.结果经酶切产物电泳分析和DNA序列测定证明成功构建出HMGN2基因重组原核表达载体pGEX-1λT-HMGN2.转化大肠杆菌经异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得相对分子质量约35×103的GST-HMGN2融合蛋白.该融合蛋白免疫所得免疫血清经ELISA检测显示获得滴度为1∶2000的较高效价的兔抗人HMGN2多克隆抗体.并应用此抗体对THP-1细胞进行的免疫细胞化学染色显示,经LPS刺激后除细胞核外,胞浆亦明显着色.而且用ELISA法在细胞培养液亦检测到HMGN2.结论本实验成功制备出HMGN2特异多克隆抗体,免疫细胞化学分析初步证明在LPS刺激下HMGN2不仅分布于单核吞噬细胞核,还分布于细胞浆,并可释放到细胞外.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯云	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	57	195	8.0	11.0
2	黄宁	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	131	466	11.0	16.0
3	吴琦	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	90	334	10.0	15.0
4	熊文碧	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	35	114	6.0	9.0
5	王国兴	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	12	58	5.0	7.0
6	李绚	四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室	8	88	4.0	8.0
7	王伯瑶		1	5	1.0	1.0