重组人HMGN2在大肠杆菌中表达及其体外抗乙型肝炎病毒活性研究

• 作者: 何兴俐 冯云 张永红 金淑慧
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率非组蛋白N2 原核表达 抗HBV活性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 461-465
• 分类号: R512.62
• 语种: 中文

摘要

目的 制备重组人高迁移率非组蛋白N2蛋白(HMGN2),研究重组HMGN2的抗乙型肝炎病毒(HBV)活性.方法 通过RT-PCR分离纯化人HMGN2基因,并将其构建到原核表达质粒pGEX-4T-1中,经IPTG诱导表达.产物经GST蛋白纯化系统进行纯化,用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定.采用MTT法检测重组HMGN2蛋白对稳定转染复制型HBV重组质粒的肝癌细胞株HepG2.2.15细胞的细胞毒性;不同浓度HMGN2蛋白作用于HepG2.2.15细胞,分别在第3 d和6 d收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg),采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBV DNA的含量.结果 成功构建了HMGN2蛋白原核表达载体pGEX-HMGN2,并分离提纯了原核表达的HMGN2蛋白.Western blot结果显示,该蛋白能被抗HMGN2抗体识别.在检测的1～100μg/mL范围内,HMGN2蛋白对HepG2.2.15细胞的无细胞毒性;HMGN2蛋白在1～5μg/mL水平即可抑制HBeAg和HBsAg的表达,可降低HBV DNA拷贝数.结论 成功构建HMGN2原核表达载体,并分离提纯了纯度较高的HMGN2蛋白;重组的HMGN2蛋白在体外具有较强的抗HBV活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯云	四川大学口腔疾病研究国家重点实验室	57	195	8.0	11.0
2	张永红	四川大学口腔疾病研究国家重点实验室	17	98	5.0	9.0
3	金淑慧	四川大学口腔疾病研究国家重点实验室	2	1	1.0	1.0
4	何兴俐	四川大学口腔疾病研究国家重点实验室	1	0	0.0	0.0