岩栖蝮蛇毒腺cDNA文库构建、降纤酶基因克隆和序列分析

• 作者: 孙德军 常淑芳 杨春伟 赵轶卓 颜炜群
• 来源期刊: 中国生化药物杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 岩栖蝮蛇 毒腺cDNA文库 降纤酶 序列分析
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 151-155
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 2632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1678.2005.03.009

摘要

目的采用链转化法和长距离PCR技术,构建岩栖蝮蛇(Gloydiussaxatilis)毒腺cDNA文库,克隆、分析降纤酶基因.方法用Trizol试剂盒从岩栖蝮蛇毒腺提取总RNA,再用oligo(dT)-生物素-链菌素-磁珠法从总RNA中分离mRNA,反转录合成cDNA第一链,长距离PCR合成第二链cDNA.回收cDNA用限制性内切酶消化产生黏性末端,色谱去除小于500bp片段,纯化的cDNA插入载体pBluescript,电转化E.coliDH5α,得到岩栖蝮蛇毒腺cDNA文库;测定制备的降纤酶上游氨基酸序列,并推导其基因序列,合成引物.从该cDNA文库克隆降纤酶基因并分析基因结构.结果岩栖蝮蛇毒腺cDNA文库的库容为2.0×106,降纤酶基因开框读码序列全长777个核苷酸,编码258个氨基酸,活性中心His65、Asp110、Ser204和6对二硫键进化上高度保守.结论该文库符合建库标准库容要求,为筛选新的目的基因和进一步基因操作提供了有效平台;克隆的降纤酶基因与GeneBank中其它蛇毒丝氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性在86%以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜炜群	吉林大学再生医学科学研究所	112	467	9.0	16.0
2	赵轶卓	吉林大学再生医学科学研究所	12	61	4.0	7.0
3	孙德军	吉林大学再生医学科学研究所	24	83	6.0	7.0
4	杨春伟	吉林大学再生医学科学研究所	14	62	4.0	7.0
5	常淑芳	吉林大学再生医学科学研究所	17	80	5.0	8.0