乌苏里蝮蛇丝氨酸蛋白酶基因克隆和序列分析

• 作者: 刘珊珊 孙德军 常淑芳 杨春伟 赵轶卓 颜炜群
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 蝮蛇属 毒腺 cDNA文库 安克洛酶 序列分析,蛋白质
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 325-329
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 3466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2005.03.001

摘要

目的:构建乌苏里蝮蛇(Gloydius ussuriensis)毒腺cDNA文库,克隆、分析丝氨酸蛋白酶基因,为进一步基因研究和操作奠定基础.方法:采用链转化法和长距离PCR技术,构建乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库.用TRIzol试剂盒从乌苏里蝮蛇毒腺提取总RNA,再用Oligo(dT)-生物素-链菌素-磁珠法从总RNA中分离mRNA,反转录合成cDNA第一链,长距离PCR合成第二链cDNA.回收cDNA,用限制性内切酶消化产生粘性末端,层析去除小于500 bp片段,纯化的cDNA插入载体pBluescript-sk,电转化E.coli DH5α,得到乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库,测定丝氨酸蛋白酶上游氨基酸序列,并推导其基因序列,合成引物.从该cDNA文库克隆丝氨酸蛋白酶基因,并进行序列测定和分析.结果:该文库库容为2.3×106,该cDNA文库为筛选新的目的基因和进一步基因操作提供了有效平台.序列测定和分析显示丝氨酸蛋白酶基因开框读码序列全长702个核苷酸,编码234个氨基酸,活性中心His41、Asp86、Ser180和6对二硫键进化上高度保守.结论:该文库库容大于通用的105标准,符合规定可作为进一步基因操作平台,克隆的丝氨酸蛋白酶基因与GeneBank中其他蛇毒丝氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性在85%以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘珊珊	吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室	43	135	6.0	10.0
2	赵轶卓	吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室	12	61	4.0	7.0
3	孙德军	吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室	24	83	6.0	7.0
4	杨春伟	吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室	14	62	4.0	7.0
5	常淑芳	吉林大学再生医学科学研究所生化与生物技术药物教研室	17	80	5.0	8.0