可溶性HLA-G1重链分子的构建、表达及纯化

• 作者: 吴雄文 尹姝晗 杨敬宁 梁智辉 蔡蕾 陆盛军 韩军艳 黄亚非 龚非力
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人白细胞抗原 点突变 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 287-290
• 页数: 4页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3927字
• 语种: 中文

摘要

目的:获取原核表达的可溶性HLA-G1重链分子(heavy chain of soluble HLA-G1,sHLA-G1-hc),为进一步构建可溶性HLA-G1单体分子奠定基础.方法:应用引物点突变技术,RT-PCR扩增去信号肽的可溶性HLA-G1重链分子的cDNA序列,构建表达载体pET22b/sHLA-G1-hc,导入大肠杆菌BL21(DE3)plys,IPTG诱导sHLA-G1-hc-6(his融合蛋白表达,提取包涵体蛋白,溶解后经Ni-NTA亲和层析纯化,透析后浓缩保存.SDS-PAGE、Western blot鉴定目的蛋白的表达和纯化.结果:克隆基因序列符合重链基因特征;表达产物以包涵体形式为主,表达量占菌体总蛋白的20%;纯化后证明表达产物具有较高纯度达到95%.结论:成功构建可溶性HLA-G1重链分子原核表达载体,为阐明可溶性HLA-G1的功能奠定基础.