口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因的克隆表达及3B-ELISA鉴别诊断方法的初步建立

• 作者: 何启盖 刘正飞 王贵平 钱平 阮力 陈焕春
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3B基因 表达 鉴别诊断 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 490-493
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2005.05.013

摘要

从口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)细胞培养物中提取总RNA,经一步法RT-PCR获得了长约230 bp的3B基因片段,将PCR产物连接到pMD-18T载体上并测序,用BamH Ⅰ与HindⅢ双酶切后,将3B基因融合到pGEX-KG载体上形成表达质粒pGEX-KG-3B,转化到BL21(DE3)中在27℃诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质斑点ELISA.结果表明3B基因主要以可溶形式高效表达,表达产物具有免疫原性.以纯化的表达产物为抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA).方阵滴定其最佳包被浓度是6.1μg/孔,最佳血清稀释倍数为1:80,通过测定36份FMDV阴性血清,确定了该方法的阳性判定标准.结果表明,该方法特异性强、重复性好;用3B-ELISA方法与美国联合生物医学公司(UBI)生产的合成肽检测试剂盒UBI(R)FMDV NS-ELISA对比检测44份血清样品,符合率为93.1%.证明3B-ELISA方法可用于口蹄疫的鉴别诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学动物医学院	331	4866	36.0	53.0
2	何启盖	华中农业大学动物医学院	170	2510	25.0	42.0
3	刘正飞	华中农业大学动物医学院	40	892	15.0	29.0
4	阮力	华中农业大学动物医学院	2	9	1.0	2.0
5	钱平	华中农业大学动物医学院	28	293	10.0	16.0
6	王贵平	华中农业大学动物医学院	3	48	2.0	3.0