Trametes sp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5'-端调控区的克隆与分析

• 作者: 周宏敏 张书祥 房伟 李剑凤 查向东 洪宇植 肖亚中
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 真菌漆酶 定量RT-PCR 长距离反向PCR 顺式作用元件
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 547-552
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.008

摘要

Trametes sp.AH28-2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成.在以葡萄糖为碳源补加0.5mmol/L Cu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44.3u/L,同时补加4.0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71.0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36.4倍.邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA).竞争性RT-PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平.lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性.采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA 5'-端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等.这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律.