肺炎支原体P1黏附蛋白基因的克隆与表达

• 作者: 李保强 王桂珍 董占双 赵芝娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎支原体 P1黏附蛋白 克隆表达
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 470-472,478
• 页数: 4页
• 分类号: R375
• 字数: 2693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.06.006

摘要

目的对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)3'端的P1黏附蛋白基因片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和表达产物的免疫性分析,为临床诊断试剂和疫苗的研制打下基础.方法应用PCR技术直接从Mp FH株染色体DNA中扩增894 bp的3'端p1基因片段(p1'),将此基因片段插入表达载体pGEX-6P-1后,转入大肠杆菌BL21扩增后提取重组质粒进行酶切、PCR扩增及核苷酸测序进行鉴定.诱导阳性克隆株表达重组蛋白后纯化,用兔抗Mp多克隆血清通过免疫印迹实验鉴定其免疫反应性.结果插入重组质粒的p1基因片段经测序后,与GenBank中p1基因核苷酸序列(AF290001、AF290002、AF286371、AE000002、M21519、M18639)比较,其同源性为99.66%～100%.氨基酸序列同源性为99.32%～100%.经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为59kDa.免疫印迹实验证实重组蛋白是P1黏附蛋白抗原.结论成功构建了pGEX-6P-1-p1'重组质粒并获得表达.此p1'基因重组质粒表达的蛋白具有免疫反应性,有希望成为特异性抗原诊断试剂和疫苗的候选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王桂珍	中国医科大学病原生物学教研室	33	103	6.0	8.0
2	董占双	中国医科大学病原生物学教研室	13	52	3.0	7.0
3	赵芝娜	沈阳药科大学微生物与细胞生物学教研室	6	55	2.0	6.0
4	李保强	沈阳202医院医务科	1	15	1.0	1.0