肺炎支原体P1蛋白抗原决定簇在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 刘哲伟 包怡华 吴建新 孙红妹 张霆 曹玉璞 赵汉青 郭章溉
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎支原体 P1蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 666-669
• 页数: 4页
• 分类号: R375
• 字数: 3045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.08.004

摘要

目的得到肺炎支原体主要粘附蛋白(P1蛋白)的表达蛋白.材料与方法用PCR产物限制性片段长度多肽性(RFLP)分析等方法鉴定实验用肺炎支原体菌株.针对P1蛋白基因设计上、下游引物,进行PCR扩增.对PCR产物进行回收、纯化,克隆入PET-28C(+)表达载体,并转化入宿主菌BL21.对重组质粒进行酶切及PCR鉴定后,IPTG诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并以Ni-Agarose亲和层析柱纯化.结果1)本实验所用菌株为肺炎支原体2型.2)经PCR扩增得到预期含有BamHI和XhoI的533bp的目的片段.3)完成目的基因片段的克隆与表达,得到20kDa左右表达蛋白.经诱导阳性质粒的蛋白表达,得到较大量纯化的目的蛋白. 结论本研究以国际标准株FH为模板,成功获得纯化的近20kDa的P1蛋白片段,其大小与目的片段理论值相符,且此片段在肺炎支原体1型与2型中的基因同源性为98%.为在基因和蛋白水平进一步研究肺炎支原体P1蛋白成分在肺炎支原体粘附和引起机体免疫反应中的作用机制,打下了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘哲伟		29	180	5.0	13.0
2	吴建新		64	571	12.0	21.0
3	张霆		79	456	12.0	17.0
4	孙红妹		35	370	10.0	18.0
5	赵汉青		23	146	6.0	11.0
6	包怡华		9	28	4.0	5.0
7	郭章溉		4	10	2.0	3.0
8	曹玉璞		2	5	1.0	2.0