犬冠状病毒S糖蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及其免疫原性研究

• 作者: 乔军 夏咸柱 杨松涛 胡桂学 谢之景 闫芳 高玉伟 黄耕
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬冠状病毒 纤突糖蛋白 重组犬2型腺病毒
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 588-592
• 页数: 5页
• 分类号: S85
• 字数: 4851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.04.022

摘要

首次构建了能表达犬冠状病毒纤突糖蛋白(CCV S1)的重组犬2型腺病毒(CAV-2).用RT-PCR方法从CCVDXMV株细胞培养物中扩增出编码S糖蛋白A、B、C和D 4个抗原位点的基因片段S1,将其克隆到pVAX1中,然后将含有CCV S1基因的完整表达盒(CMV-S1-PolyA)进一步定向克隆到含有CAV-2 E3区的穿梭质粒pVAXE3中,构建出pVAX△E3S1.通过Sal Ⅰ+Nru Ⅰ双酶切pVAX△E3S1回收含有目的基因的表达盒,将其克隆入含有CAV-2全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,获得重组质粒pCAV-2-CCV-S1.Cla Ⅰ+Asc Ⅰ酶切pCAV-2-CCV-S1释放重组基因组,转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-S1.该重组病毒在MDCK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变.通过mRNA水平和Western blot检测,证实重组病毒能表达CCV S1蛋白.动物免疫试验表明,该重组病毒可以有效地诱导免疫犬产生抗CCV和CAV-2抗体.