人α1微球蛋白基因的质粒载体构建和表达

• 作者: 夏铁安 徐国宾 赵昕 陆学军
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 生物学
• 关键词: 胶质瘤 基因治疗
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著及论著摘要
• 页码范围: 531-534
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 4113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2005.04.015

摘要

目的构建表达人α1-微球蛋白(α1-microglobulin,α1-MG)的重组质粒并纯化目的蛋白.方法从正常人肝脏中提取cDNA,RT-PCR扩增α1-mg基因,将扩增产物用NdeⅠ/BamHⅠ消化,切下目的基因片断克隆到质粒pET-15b中,构建重组pET-15b,转化入E.coli DH5α中,经酶谱分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pET-15b.将重组pET-15b转化入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达.提取细菌总蛋白质进行SDS-PAGE分析和蛋白印迹鉴定.利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的"标签"进行亲和层析,纯化重组蛋白.结果筛选到携带有α1-mg基因的正确重组质粒pET-15b,重组蛋白在BL21(DE3)pLysS中得到了诱导表达,含量达20mg/L细菌培养液.经一步金属螯合亲和层析纯化后,重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出均一的单一条带.结论重组质粒pET-15b的构建和有活性的酶蛋白的表达成功说明,PCR扩增获得的α1-mg基因具有完整的阅读框架,亲和层析纯化后可得到活性和纯度均较高的目的蛋白,为研制国产免疫比浊法试剂盒打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵昕	卫生部北京医院检验科	11	89	4.0	9.0
2	徐国宾	北京大学第一医院检验科	130	2817	24.0	49.0
3	夏铁安	北京大学第一医院检验科	50	1046	17.0	31.0
4	陆学军	卫生部北京医院检验科	4	11	2.0	3.0