人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化

• 作者: 张承武 李自成 翟朝阳 蔡青松 郑煜
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经营养素-6 成熟肽 融合表达
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1241-1244
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3541字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-5515.2005.06.039

摘要

为了得到人源性神经营养素-6(Neurotrophin-6, NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体pGEX1-λT,构建重组原核融合表达质粒pGEX-NT-6;在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导的条件下,观察融合蛋白在大肠杆菌JM109中的表达情况;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化.结果表明经PCR扩增后,得到一分子量为460 bp左右的片段 ;含有该片段的重组质粒经电泳及双酶切鉴定表明,所得到的重组质粒即为含有目的片段的pGEX1-NT-6;与带有pGEX1-λT质粒的细菌相对照,pGEX1-NT-6质粒转化的大肠杆菌JM109,在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,该蛋白分子量为41 KD.获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量大约为15 KD的 NT-6成熟肽.本研究成功构建了人源性NT-6成熟肽编码区基因融合表达载体,并纯化了其表达产物,为研究人源性NT-6的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑煜	四川大学华西基础医学与法医学院	44	102	5.0	6.0
2	张承武	四川大学华西基础医学与法医学院	9	37	3.0	5.0
3	蔡青松	四川大学华西基础医学与法医学院	2	24	2.0	2.0
4	李自成	四川大学华西基础医学与法医学院	3	14	2.0	3.0
5	翟朝阳	四川大学华西基础医学与法医学院	19	188	7.0	13.0