HIV-1 Gag蛋白 P2/NC 蛋白酶切割位点序列的随机化及噬菌体展示

• 作者: 周波 温宗梅 潘卫 潘欣 蒋少华 贾建安 邓松华 陈秋莉
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1 蛋白酶 切割位点序列 随机化 噬菌体展示文库
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1243-1247
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4803字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2005.11.011

摘要

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响.方法:PCR扩增制备重组HIV-1 gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点.应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库.结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布; 10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合.结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓松华	安徽医科大学病理生理学教研室	34	128	6.0	9.0
2	潘欣	第二军医大学基础医学部微生物学教研室	48	238	9.0	13.0
3	陈秋莉	第二军医大学基础医学部微生物学教研室	16	102	6.0	9.0
4	蒋少华	第二军医大学基础医学部微生物学教研室	10	76	5.0	8.0
5	周波	安徽医科大学病理生理学教研室	14	61	5.0	7.0
6	贾建安	第二军医大学基础医学部微生物学教研室	3	5	2.0	2.0
7	温宗梅	安徽医科大学病理生理学教研室	1	3	1.0	1.0