血红素氧化酶1基因重组腺病毒的构建

• 作者: 吴雄飞 戴卫华 金锡御
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 血红素氧化酶 同源重组 细菌
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1498-1499,1502
• 页数: 3页
• 分类号: Q754|Q554.9
• 字数: 2777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2005.10.026

摘要

目的利用细茵内同源重组法构建含血红素氧化酶1基因的重组腺病毒.方法用限制性内切酶XhoⅠ+HindⅢ从克隆载体PRH01中切出血红素氧化酶1基因片段,亚克隆至经Sal Ⅰ+HindⅢ酶切的克隆质粒Puc18中,形成转移质粒Puc18-PRHO1,将之用KpnⅠ+HindⅢ双酶切,再次亚克隆至经同样酶切的质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrackPuc18-PRHO1,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒,PacⅠ酶切后用脂质体转染293细胞,包装成重组体腺病毒Ad-H01.采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.结果利用CaCl2法由pAdTrack-Puc18-PRHO1和pAdEasy-1共转化BJ5183感受态菌,可获得阳性重组体细菌克隆.PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因,滴度为1.4×1010pfu/ml.结论细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法.所制备的重组体腺病毒Ad-H01在体外能有效表达相应的基因产物,为今后对血红素氧化酶1的深入研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金锡御	第三军医大学西南医院全军泌尿中心肾科	160	902	15.0	20.0
2	吴雄飞	第三军医大学西南医院全军泌尿中心肾科	165	855	16.0	22.0
3	戴卫华	第三军医大学西南医院全军泌尿中心肾科	3	1	1.0	1.0