血红素氧化酶1基因重组腺病毒的构建及感染效率鉴定

• 作者: 吴雄飞 戴卫华 金锡御
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒科 血红素氧化酶(脱环) 细菌
• 年，卷（期）: 2005,（27）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 70-71
• 页数: 2页
• 分类号: R349.8
• 字数: 3112字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.27.040

摘要

目的:构建含血红素氧化酶1基因的重组腺病毒及鉴定感染效率. 方法:实验于2003-05/2004-06在解放军第三军医大学西南医院消化科实验室完成.①用限制性内切酶XhoⅠ+HindⅢ从克隆载体PRH01中切出血红素氧化酶1基因片段,亚克隆至Puc18中,将之用KpnⅠ+HindⅢ双酶切,再次亚克隆至质粒pAdTrack-巨细胞病毒中,形成转移质粒pAdTrack-Puc18-PRHO1.②将pAdTrack-Puc18-PRHO1 PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,得到含目的基因的重组体质粒.③重组腺病毒PacⅠ酶切后用脂质体转染293细胞,包装成重组体腺病毒AdH01.④对重组体腺病毒进行鉴定采用聚合酶链反应方法. 结果:①利用氯化钙法由pAdTrack-Puc18-PRHO1和pAdEasy-1共转化BK5183感受态菌,可获得阳性重组体细菌克隆.②重组腺病毒基因组DNA,用目的基因血红素氧化酶1引物进行聚合酶链反应检测,可特异性扩增出356 bp的预期条带,而空载体组未能扩增出此片段,表明血红素氧化酶1基因已克降人重组体腺病毒基因组中,根据绿色荧光蛋白记数法测得腺病毒滴度1.4×1013空斑形成单位/L.③重组腺病毒感染效率的测定结果:用浓缩后的重组腺病毒以感染复数为10感染肾小球内皮细胞,约85%的内皮细胞出现荧光,表明腺病毒AdH01在体外能有效表达相应的基因产物. 结论:细菌内同源重组法获得AdH01在体外能有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴雄飞	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿中心肾科	3	2	1.0	1.0
2	金锡御	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿中心肾科	6	23	3.0	4.0
3	戴卫华	解放军第三军医大学西南医院全军泌尿中心肾科	1	0	0.0	0.0