人白细胞介素-29cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达

• 作者: 张胜权 徐从贞 罗欣 陈兵 鲁云霞
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素类 克隆,分子 包涵体 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5-7
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2618字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2005.01.003

摘要

目的:克隆人细胞因子 IL- 29全长 cDNA及其在大肠杆菌中表达,制备抗 IL- 29多克隆抗体.方法:分离外周血单核细胞; vsv感染后,提取总 RNA,通过一步 RT- PCR获得 IL- 29全长 cDNA. DNA测序正确后,将 IL- 29cDNA的编码框序列构建到原核表达载体 pET28a(+ )中.卡那霉素平板筛选及 PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行 IPTG诱导表达. SDS- PAGE、 Western blotting鉴定,亲和层析分离纯化得到 Mr为 23 000组氨酸标签重组人 IL- 29融合蛋白.纯化的 IL- 29免疫家兔制备抗 IL- 29多克隆抗体.结果:成功获得人 IL- 29全长 cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中.免疫家兔后获得特异抗 IL- 29的多克隆抗体.结论:获得 rhIL- 29细胞因子及其多克隆抗体,为其进一步研究及应用奠定基础.