卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析

• 作者: 李琦 王雅琴 谭天伟 邱俊康
• 来源期刊: 北京化工大学学报（自然科学版）
• 学科: 工学
• 关键词: 卡门柏青霉-PG3 甘油单-双酰酯脂肪酶 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 12-15
• 页数: 4页
• 分类号: TQ033|Q786
• 字数: 3138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4628.2006.01.004

摘要

以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致.将此基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶(rMDGL)在宿主菌中得到表达,表达量可达菌体总蛋白量的45.2%.重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一区带,其相对分子质量为41 000.以橄榄油为底物时没有检测到酶活性,以单硬脂酸甘油脂为底物时酶活性达到225 nmol/s.该基因在原核系统中表达仍具有酶活性,说明MDGL的糖基化对其生物学活性并不是必不可少的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭天伟	北京化工大学生命科学与技术学院	314	5281	37.0	56.0
5	王雅琴	北京化工大学生命科学与技术学院	25	478	9.0	21.0
6	李琦	北京化工大学生命科学与技术学院	3	15	3.0	3.0
7	邱俊康	北京化工大学生命科学与技术学院	1	5	1.0	1.0