人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响

• 作者: 史一欢 周立华 李朝军 温传俊 薛斌 郭仕英
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: hNRAGE 腺病毒载体 同源重组 细胞周期
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 18-21
• 页数: 4页
• 分类号: Q291
• 字数: 3734字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.01.006

摘要

目的:构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响.方法:采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE.经测序检测后,用Pme I酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组.经Pac I酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒.利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度.用Western blot检测目的基因的表达.采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响.结果:成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体.Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达.收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL.转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少.结论:hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李朝军		56	497	12.0	19.0
2	温传俊	南京师范大学生命科学学院分子医学生物技术江苏省重点实验室	15	39	4.0	5.0
3	郭仕英	南京师范大学生命科学学院分子医学生物技术江苏省重点实验室	9	21	3.0	3.0
4	周立华	南京师范大学生命科学学院分子医学生物技术江苏省重点实验室	1	5	1.0	1.0
5	薛斌	南京师范大学生命科学学院分子医学生物技术江苏省重点实验室	2	9	2.0	2.0
6	史一欢	南京师范大学生命科学学院分子医学生物技术江苏省重点实验室	1	5	1.0	1.0