中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域的原核表达及复性

• 作者: 刘嘉 张振华 杨东亮 杨燕 王宝菊 田拥军 郝友华 黄凰
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 旱獭 去唾液酸糖蛋白受体 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 255-259
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3704字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2006.04.003

摘要

目的 对中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的克隆、表达、纯化及复性.方法 用RT-PCR从中国旱獭肝组织中扩增ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,分别将其克隆到原核表达载体pRSET-B上,在埃希菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达含6个组氨酸标签的融合蛋白.融合蛋白经Ni2+螯合柱亲和纯化后,在体外行透析复性.结果 ASGPR CRDH1和CRDH2经原核表达后得到分子量约为22 ku和15 ku的目的蛋白,以包涵体形式存在.经Ni2+螯合柱亲和纯化后获得纯度大于95%的融合蛋白.利用仅识别天然构像的单克隆抗体对复性后产物进行检测,证明复性成功.结论 成功地表达了具有活性的ASGPR CRDH1和CRDH2的融合蛋白,在肝脏疾病的靶向治疗研究中具有潜在的应用价值.