中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体糖基结合域的原核表达与多克隆抗体的制备

• 作者: 刘慎沛 张振华 杨东亮 杨燕 王宝菊 田拥军 黄凰
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 去唾液酸糖蛋白受体 中国旱獭 多克隆抗体 靶向治疗
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 443-447,459
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5244字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体.方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性.结果:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2,目的蛋白可以高效表达,用其免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论:首次成功表达了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域多肽,且纯度高,免疫原性强,用其免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性好、效价高,为在HBV感染模型-中国旱獭体内进行肝脏疾病的靶向治疗奠定了实验基础.