去唾液酸糖蛋白受体单链抗体与绿色荧光蛋白的融合表达及其靶向性观察

• 作者: 卢志贤 曹利民 潘宇红 程华莉 陈江
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌 单链抗体 增强型绿色荧光蛋白 融合表达
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1192-1195,封三
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2006.12.011

摘要

目的:表达和纯化去唾液酸糖蛋白受体单链抗体C1与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白,体外观察其肝癌细胞的特异性结合能力.方法:通过扩增构建成含C1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的原核表达质粒GFPC1/pET-26b;测序验证后转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,荧光显微镜下观察融合基因中GFP的表达情况;用Ni2+螯合柱亲和纯化融合蛋白GFPC1,SDS-PAGE检测融合基因的表达和纯化的融合蛋白GFPC1;纯化的融合蛋白GFPC1与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体C1对肝癌细胞的靶向作用.结果:IPTG诱导表达后在荧光显微镜下可以观察到大肠杆菌发出特异性的绿色荧光;SDS-PAGE显示表达的融合蛋白GFPC1,与预期的大小相一致,以包涵体的形式存在;通过变性条件下Ni2+亲和柱纯化获得较GFPC1重组融合蛋白,免疫荧光检测表明纯化的GFPC1可与HepG2细胞膜特异结合.结论:利用GFP作为标记分子,观察到去唾液酸糖蛋白受体单链抗体C1与HepG2细胞膜较强的结合能力,为应用C1对肝癌进行靶向生物治疗奠定基础;构建成功的GFP/pET-26b原核表达系统为其他靶分子的研究提供了一个有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘宇红	南通大学附属无锡三院检验科	25	84	6.0	7.0
2	程华莉	南通大学附属无锡三院检验科	17	52	4.0	6.0
3	卢志贤	南通大学附属无锡三院检验科	2	11	2.0	2.0
4	陈江	南通大学附属无锡三院检验科	1	4	1.0	1.0
5	曹利民	南通大学附属无锡三院检验科	1	4	1.0	1.0