BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子载体的构建及表达

• 作者: 周勇 王全立 王海平 高明
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗原递呈 BALB/c小鼠 I-Adαβ链 转染 NIH3T3细胞
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 41-43
• 页数: 3页
• 分类号: R392.2
• 字数: 2183字
• 语种: 中文

摘要

目的:为了获取BALB/c小鼠I-Adα、β链编码基因,构建真核双顺反子表达载体并在NIH3T3细胞中表达,建立BALB/c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈细胞研究模型.方法:采用Trizol提取BALB/c小鼠脾细胞总RNA,RT-PCR获取I-Adαβ链cDNA,连接pGEMT载体测序,正确后亚克隆至pIRES真核双顺反子表达载体;用Lipofectamine2000转染NIH3T3细胞,G418筛选转染克隆株.RT-PCR鉴定外源基因在mRNA水平的表达;流式细胞术(FCM)鉴定外源基因在蛋白质水平的表达以及在细胞表面展示的水平.结果:建立了BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子表达载体pIRES-I-Adαβ;pIRES-I-Adαβ转染NIH3T3细胞,在G418筛选下可获得高达72%的转染细胞;转染细胞总RNA RT-PCR显示外源基因在mRNA水平得到表达;FCM显示外源基因编码的蛋白高水平表达并定位于细胞表面.结论:为进一步研究BALB/c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈的分子机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王全立	军事医学科学院野战输血研究所	126	899	16.0	25.0
2	王海平	军事医学科学院野战输血研究所	32	78	5.0	7.0
3	高明	军事医学科学院野战输血研究所	10	52	5.0	6.0
4	周勇	军事医学科学院野战输血研究所	27	103	6.0	9.0